CIK免疫细胞培养SOP
一、冻存脐血单个核细胞复苏：1、从液氮中取出一份脐血单个核细胞，迅速置于37度-42度水浴中，快速摇动使其在1分钟内融化。酒精消毒外表面，移至生物安全柜中。
https://www.pall.cn/content/dam/pall/site-wide/support/supportStrip500x500.jpg
2、生物安全柜内将一个冻存袋中细胞转移到50ml离心管中，补加X-2(CIK)15ml。
3、离心1500rpm，10min，4℃，升速max，降速max。
4、吸去上清，细胞沉淀用含H（CIK）和10%C液的M（CIK）完全培养基（以下称完全培养基）重悬，计数后调整细胞浓度为2——3×106/ml，接种到T175培养瓶中。
二、CIK培养：
1、第0天，根据培养基量，在T175培养瓶中加入细胞因子4（1μl/ml），晃动培养瓶混匀。
2、24h后，加入细胞因子1（1μl/ml）、细胞因子2（1μl/ml）、细胞因子3（0.5μl/ml），晃动培养瓶混匀。.
3、第3天，加入1倍体积的完全培养基，并补充细胞因子2（1μl/ml）、细胞因子3（0.5μl/ml）。
4、第5天，加入1倍体积的完全培养基，并补充细胞因子2（1μl/ml）、细胞因子3（0.5μl/ml）。
5、第7天，用移液管将培养瓶中细胞打均匀取样计数，根据计数情况补加完全培养基，调整细胞浓度1——2×106/ml，并补充细胞因子2（1μl/ml）。
6、第9天，用移液管将培养瓶中细胞打均匀取样计数，根据计数情况补加完全培养基，调整细胞浓度1——2×106/ml，并补充细胞因子2（1μl/ml）。
7、第11天，用移液管将培养瓶中细胞打均匀取样计数，根据计数情况补加完全培养基，调整细胞浓度1——2×106/ml，并补充细胞因子2（1μl/ml）。并根据细胞总量将细胞悬液平分在5个细胞培养袋中。
8、第13天，用手将培养袋中细胞晃动混匀，用10ml注射器从取样孔取样计数，根据计数情况补加完全培养基，调整细胞浓度1——2×106/ml，并补充细胞因子5（1000IU/ml）。
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