CIK免疫细胞培养SOP

ningxueqin · 发表于 2021-8-25 19:44:25

　　一、冻存脐血单个核细胞复苏：

　　1、从液氮中取出一份脐血单个核细胞，迅速置于37度-42度水浴中，快速摇动使其在1分钟内融化。酒精消毒外表面，移至生物安全柜中。

　　2、生物安全柜内将一个冻存袋中细胞转移到50ml离心管中，补加X-2(CIK)15ml。

　　3、离心1500rpm，10min，4℃，升速max，降速max。

　　4、吸去上清，细胞沉淀用含H（CIK）和10%C液的M（CIK）完全培养基（以下称完全培养基）重悬，计数后调整细胞浓度为2——3×106/ml，接种到T175培养瓶中。

　　二、CIK培养：

　　1、第0天，根据培养基量，在T175培养瓶中加入细胞因子4（1μl/ml），晃动培养瓶混匀。

　　2、24h后，加入细胞因子1（1μl/ml）、细胞因子2（1μl/ml）、细胞因子3（0.5μl/ml），晃动培养瓶混匀。.

　　3、第3天，加入1倍体积的完全培养基，并补充细胞因子2（1μl/ml）、细胞因子3（0.5μl/ml）。

　　4、第5天，加入1倍体积的完全培养基，并补充细胞因子2（1μl/ml）、细胞因子3（0.5μl/ml）。

　　5、第7天，用移液管将培养瓶中细胞打均匀取样计数，根据计数情况补加完全培养基，调整细胞浓度1——2×106/ml，并补充细胞因子2（1μl/ml）。

　　6、第9天，用移液管将培养瓶中细胞打均匀取样计数，根据计数情况补加完全培养基，调整细胞浓度1——2×106/ml，并补充细胞因子2（1μl/ml）。

　　7、第11天，用移液管将培养瓶中细胞打均匀取样计数，根据计数情况补加完全培养基，调整细胞浓度1——2×106/ml，并补充细胞因子2（1μl/ml）。并根据细胞总量将细胞悬液平分在5个细胞培养袋中。

　　8、第13天，用手将培养袋中细胞晃动混匀，用10ml注射器从取样孔取样计数，根据计数情况补加完全培养基，调整细胞浓度1——2×106/ml，并补充细胞因子5（1000IU/ml）。